Atividade larvicida e anti-cupim de biossurfactantes microbianos produzidos por Enterobacter cloacae SJ2 isolado da esponja Clathria sp.

O uso generalizado de pesticidas sintéticos tem levado a muitos problemas, incluindo o surgimento de organismos resistentes, a degradação ambiental e danos à saúde humana. Portanto, novos microrganismos são necessários.pesticidasHá uma necessidade urgente de biossurfactantes seguros para a saúde humana e o meio ambiente. Neste estudo, o biossurfactante ramnolípido produzido por Enterobacter cloacae SJ2 foi utilizado para avaliar sua toxicidade em larvas de mosquito (Culex quinquefasciatus) e cupim (Odontotermes obesus). Os resultados mostraram uma taxa de mortalidade dose-dependente entre os tratamentos. O valor de CL50 (concentração letal 50%) em 48 horas para o biossurfactante em larvas de cupim e mosquito foi determinado utilizando um método de ajuste de curva de regressão não linear. Os resultados mostraram que os valores de CL50 em 48 horas (intervalo de confiança de 95%) da atividade larvicida e anti-cupim do biossurfactante foram de 26,49 mg/L (variação de 25,40 a 27,57) e 33,43 mg/L (variação de 31,09 a 35,68), respectivamente. De acordo com o exame histopatológico, o tratamento com biossurfactantes causou danos severos aos tecidos organelares de larvas e cupins. Os resultados deste estudo indicam que o biossurfactante microbiano produzido por Enterobacter cloacae SJ2 é uma ferramenta excelente e potencialmente eficaz para o controle de Cx. quinquefasciatus e O. obesus.
Países tropicais sofrem com um grande número de doenças transmitidas por mosquitos¹. A relevância dessas doenças é ampla. Mais de 400.000 pessoas morrem de malária a cada ano, e algumas grandes cidades enfrentam epidemias de doenças graves como dengue, febre amarela, chikungunya e Zika². Doenças transmitidas por vetores são responsáveis ​​por uma em cada seis infecções no mundo, sendo os mosquitos os principais causadores dos casos³.⁴ Culex, Anopheles e Aedes são os três gêneros de mosquitos mais comumente associados à transmissão de doenças⁵. A prevalência da dengue, infecção transmitida pelo mosquito Aedes aegypti, aumentou na última década e representa uma ameaça significativa à saúde pública⁴.⁷.⁸ Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), mais de 40% da população mundial está em risco de contrair dengue, com 50 a 100 milhões de novos casos ocorrendo anualmente em mais de 100 países⁹.¹⁰.¹¹ A dengue tornou-se um importante problema de saúde pública, com o aumento de sua incidência em todo o mundo12,13,14. O Anopheles gambiae, comumente conhecido como mosquito africano Anopheles, é o vetor mais importante da malária humana em regiões tropicais e subtropicais15. O vírus do Nilo Ocidental, a encefalite de St. Louis, a encefalite japonesa e infecções virais em cavalos e aves são transmitidos por mosquitos Culex, frequentemente chamados de mosquitos domésticos comuns. Além disso, eles também são vetores de doenças bacterianas e parasitárias16. Existem mais de 3.000 espécies de cupins no mundo, e eles existem há mais de 150 milhões de anos17. A maioria das pragas vive no solo e se alimenta de madeira e produtos derivados da madeira que contêm celulose. O cupim indiano Odontotermes obesus é uma importante praga que causa sérios danos a importantes culturas agrícolas e árvores de plantação18. Em áreas agrícolas, infestações de cupins em vários estágios podem causar enormes prejuízos econômicos a diversas culturas, espécies arbóreas e materiais de construção. Os cupins também podem causar problemas de saúde em humanos19.
A questão da resistência de microrganismos e pragas nos campos farmacêutico e agrícola atuais é complexa20,21. Portanto, ambas as empresas devem buscar novos antimicrobianos economicamente viáveis ​​e biopesticidas seguros. Pesticidas sintéticos já estão disponíveis e demonstraram ser infecciosos e repelentes de insetos benéficos não-alvo22. Nos últimos anos, a pesquisa sobre biossurfactantes expandiu-se devido à sua aplicação em diversas indústrias. Os biossurfactantes são muito úteis e vitais na agricultura, remediação de solos, extração de petróleo, eliminação de bactérias e insetos e processamento de alimentos23,24. Biossurfactantes ou surfactantes microbianos são substâncias químicas biossurfactantes produzidas por microrganismos como bactérias, leveduras e fungos em habitats costeiros e áreas contaminadas por petróleo25,26. Surfactantes derivados quimicamente e biossurfactantes são dois tipos obtidos diretamente do ambiente natural27. Vários biossurfactantes são obtidos de habitats marinhos28,29. Portanto, os cientistas estão buscando novas tecnologias para a produção de biossurfactantes a partir de bactérias naturais30,31. Os avanços em tais pesquisas demonstram a importância desses compostos biológicos para a proteção ambiental32. Bacillus, Pseudomonas, Rhodococcus, Alcaligenes, Corynebacterium e esses gêneros bacterianos são representantes bem estudados23,33.
Existem muitos tipos de biossurfactantes com uma ampla gama de aplicações34. Uma vantagem significativa desses compostos é que alguns deles possuem atividade antibacteriana, larvicida e inseticida. Isso significa que podem ser utilizados nas indústrias agrícola, química, farmacêutica e cosmética35,36,37,38. Como os biossurfactantes são geralmente biodegradáveis ​​e benéficos para o meio ambiente, são utilizados em programas de manejo integrado de pragas para proteger as culturas39. Assim, obteve-se conhecimento básico sobre a atividade larvicida e anti-cupins de biossurfactantes microbianos produzidos por Enterobacter cloacae SJ2. Examinamos a mortalidade e as alterações histológicas quando expostos a diferentes concentrações de biossurfactantes ramnolipídicos. Além disso, avaliamos o programa de computador de Estrutura-Atividade Quantitativa (QSAR) amplamente utilizado, o Ecological Structure-Activity (ECOSAR), para determinar a toxicidade aguda para microalgas, dáfnias e peixes.
Neste estudo, a atividade anti-cupim (toxicidade) de biossurfactantes purificados em várias concentrações, variando de 30 a 50 mg/ml (em intervalos de 5 mg/ml), foi testada contra cupins indianos, *O. obesus* e larvas de mosquitos *C. quinquefasciatus*. As concentrações de CL50 dos biossurfactantes foram determinadas ao longo de 48 horas contra *O. obesus* e *C. solanacearum*. As larvas de mosquito foram identificadas utilizando um método de ajuste de curva de regressão não linear. Os resultados mostraram que a mortalidade dos cupins aumentou com o aumento da concentração do biossurfactante. Os resultados mostraram que o biossurfactante apresentou atividade larvicida (Figura 1) e atividade anti-cupim (Figura 2), com valores de CL50 de 48 horas (IC 95%) de 26,49 mg/L (25,40 a 27,57) e 33,43 mg/L (31,09 a 35,68), respectivamente (Tabela 1). Em termos de toxicidade aguda (48 horas), o biossurfactante é classificado como “nocivo” para os organismos testados. O biossurfactante produzido neste estudo demonstrou excelente atividade larvicida, com 100% de mortalidade em 24-48 horas de exposição.
Calcule o valor de CL50 para a atividade larvicida. Ajuste da curva de regressão não linear (linha contínua) e intervalo de confiança de 95% (área sombreada) para a mortalidade relativa (%).
Calcule o valor de LC50 para a atividade anti-cupins. Ajuste da curva de regressão não linear (linha contínua) e intervalo de confiança de 95% (área sombreada) para a mortalidade relativa (%).
Ao final do experimento, alterações morfológicas e anomalias foram observadas ao microscópio. As alterações morfológicas foram observadas nos grupos controle e tratados com aumento de 40x. Como mostrado na Figura 3, houve comprometimento do crescimento na maioria das larvas tratadas com biossurfactantes. A Figura 3a mostra um Cx. quinquefasciatus normal, e a Figura 3b mostra um Cx. quinquefasciatus anômalo em cinco larvas de nematóides.
Efeito de doses subletais (CL50) de biossurfactantes no desenvolvimento de larvas de Culex quinquefasciatus. Imagem de microscopia óptica (a) de um Cx normal com ampliação de 40×. (b) Cx anormal de Culex quinquefasciatus. Causa cinco larvas de nematóides.
No presente estudo, o exame histológico das larvas tratadas (Fig. 4) e dos cupins (Fig. 5) revelou diversas anormalidades, incluindo redução da área abdominal e danos aos músculos, camadas epiteliais e pele do intestino médio. A histologia revelou o mecanismo de atividade inibitória do biossurfactante utilizado neste estudo.
Histopatologia de larvas de Cx quinquefasciatus de 4º instar normais não tratadas (controle: (a,b)) e tratadas com biossurfactante (tratamento: (c,d)). As setas indicam o epitélio intestinal tratado (epi), os núcleos (n) e o músculo (mu). Barra = 50 µm.
Histopatologia de O. obesus normal não tratado (controle: (a,b)) e tratado com biossurfactante (tratamento: (c,d)). As setas indicam epitélio intestinal (epi) e músculo (mu), respectivamente. Barra = 50 µm.
Neste estudo, o ECOSAR foi utilizado para prever a toxicidade aguda de produtos biossurfactantes ramnolípidos para produtores primários (algas verdes), consumidores primários (pulgas-d'água) e consumidores secundários (peixes). Este programa utiliza modelos sofisticados de relação estrutura-atividade quantitativa para avaliar a toxicidade com base na estrutura molecular. O modelo utiliza software de relação estrutura-atividade (SAR) para calcular a toxicidade aguda e a longo prazo de substâncias para espécies aquáticas. Especificamente, a Tabela 2 resume as concentrações letais médias estimadas (CL50) e as concentrações efetivas médias (CE50) para diversas espécies. A toxicidade suspeita foi categorizada em quatro níveis utilizando o Sistema Globalmente Harmonizado de Classificação e Rotulagem de Produtos Químicos (Tabela 3).
O controle de doenças transmitidas por vetores, especialmente cepas de mosquitos e mosquitos Aedes, é um trabalho difícil para os egípcios atualmente 40,41,42,43,44,45,46. Embora alguns pesticidas disponíveis quimicamente, como piretroides e organofosforados, sejam de certa forma benéficos, eles representam riscos significativos para a saúde humana, incluindo diabetes, distúrbios reprodutivos, distúrbios neurológicos, câncer e doenças respiratórias. Além disso, com o tempo, esses insetos podem desenvolver resistência a eles13,43,48. Assim, medidas de controle biológico eficazes e ambientalmente amigáveis ​​se tornarão um método mais popular de controle de mosquitos49,50. Benelli51 sugeriu que o controle precoce de mosquitos vetores seria mais eficaz em áreas urbanas, mas não recomendou o uso de larvicidas em áreas rurais52. Tom et al 53 também sugeriram que o controle de mosquitos em seus estágios imaturos seria uma estratégia segura e simples, pois eles são mais sensíveis aos agentes de controle54.
A produção de biossurfactante por uma cepa potente (Enterobacter cloacae SJ2) demonstrou eficácia consistente e promissora. Nosso estudo anterior relatou que a Enterobacter cloacae SJ2 otimiza a produção de biossurfactante utilizando parâmetros físico-químicos²⁶. De acordo com esse estudo, as condições ótimas para a produção de biossurfactante por um isolado potencial de E. cloacae foram: incubação por 36 horas, agitação a 150 rpm, pH 7,5, 37 °C, salinidade de 1 ppt, 2% de glicose como fonte de carbono e 1% de extrato de levedura como fonte de nitrogênio, obtendo-se 2,61 g/L de biossurfactante. Além disso, os biossurfactantes foram caracterizados por meio de TLC, FTIR e MALDI-TOF-MS. Isso confirmou que o ramnolipídio é um biossurfactante. Os biossurfactantes glicolipídicos são a classe mais intensamente estudada dentre os outros tipos de biossurfactantes⁵⁵. Eles são compostos por partes de carboidratos e lipídios, principalmente cadeias de ácidos graxos. Entre os glicolipídios, os principais representantes são o ramnolipídio e o soforolipídio56. Os ramnolipídios contêm duas porções de ramnose ligadas ao ácido mono- ou di-β-hidroxidecanoico57. O uso de ramnolipídios nas indústrias médica e farmacêutica está bem estabelecido58, além de seu uso recente como pesticidas59.
A interação do biossurfactante com a região hidrofóbica do sifão respiratório permite a passagem de água pela cavidade estomática, aumentando assim o contato das larvas com o ambiente aquático. A presença de biossurfactantes também afeta a traqueia, cujo comprimento é próximo à superfície, facilitando o deslocamento das larvas até a superfície para respirar. Como resultado, a tensão superficial da água diminui. Como as larvas não conseguem se fixar à superfície da água, elas afundam até o fundo do tanque, perturbando a pressão hidrostática, o que resulta em gasto excessivo de energia e morte por afogamento38,60. Resultados semelhantes foram obtidos por Ghribi61, onde um biossurfactante produzido por Bacillus subtilis exibiu atividade larvicida contra Ephestia kuehniella. Das e Mukherjee23 também avaliaram o efeito de lipopeptídeos cíclicos em larvas de Cx. quinquefasciatus.
Os resultados deste estudo dizem respeito à atividade larvicida de biossurfactantes ramnolipídicos contra Cx. A mortalidade de mosquitos quinquefasciatus está de acordo com resultados previamente publicados. Por exemplo, são utilizados biossurfactantes à base de surfactina produzidos por diversas bactérias do gênero Bacillus e Pseudomonas spp. Alguns relatos iniciais64,65,66 descreveram a atividade larvicida de biossurfactantes lipopeptídicos de Bacillus subtilis23. Deepali et al.63 descobriram que o biossurfactante ramnolipídico isolado de Stenotropomonas maltophilia apresentou potente atividade larvicida na concentração de 10 mg/L. Silva et al.67 relataram a atividade larvicida do biossurfactante ramnolipídico contra Ae na concentração de 1 g/L. Kanakdande et al. 68 relataram que os biossurfactantes lipopeptídicos produzidos por Bacillus subtilis causaram mortalidade geral em larvas de Culex e cupins com a fração lipofílica de Eucalyptus. Da mesma forma, Masendra et al. 69 relataram mortalidade de formigas operárias (Cryptotermes cynocephalus Light.) de 61,7% nas frações lipofílicas de n-hexano e EtOAc do extrato bruto de E.
Parthipan et al.⁷⁰ relataram o uso inseticida de biossurfactantes lipopeptídicos produzidos por Bacillus subtilis A1 e Pseudomonas stutzeri NA3 contra Anopheles stensi, vetor do parasita da malária Plasmodium. Eles observaram que larvas e pupas sobreviveram por mais tempo, apresentaram períodos de oviposição mais curtos, eram estéreis e tiveram menor longevidade quando tratadas com diferentes concentrações de biossurfactantes. Os valores de CL₅₀ observados para o biossurfactante A1 de B. subtilis foram de 3,58, 4,92, 5,37, 7,10 e 7,99 mg/L para diferentes estágios larvais (ou seja, larvas I, II, III, IV e estágio de pupa), respectivamente. Em comparação, os biossurfactantes para os estágios larvais I-IV e para os estágios pupais de Pseudomonas stutzeri NA3 foram de 2,61, 3,68, 4,48, 5,55 e 6,99 mg/L, respectivamente. Acredita-se que o atraso na fenologia das larvas e pupas sobreviventes seja resultado de distúrbios fisiológicos e metabólicos significativos causados ​​pelos tratamentos com inseticidas71.
A cepa CCMA 0358 de Wickerhamomyces anomalus produz um biossurfactante com 100% de atividade larvicida contra mosquitos Aedes aegypti. O intervalo de 24 horas foi superior ao relatado por Silva et al. Um biossurfactante produzido a partir de Pseudomonas aeruginosa, utilizando óleo de girassol como fonte de carbono, demonstrou matar 100% das larvas em 48 horas. Abinaya et al. e Pradhan et al. também demonstraram os efeitos larvicidas ou inseticidas de surfactantes produzidos por diversos isolados do gênero Bacillus. Um estudo publicado anteriormente por Senthil-Nathan et al. constatou que 100% das larvas de mosquito expostas a lagoas de plantas provavelmente morreriam.
A avaliação dos efeitos subletais de inseticidas na biologia dos insetos é crucial para programas de manejo integrado de pragas, pois doses/concentrações subletais não matam os insetos, mas podem reduzir as populações em gerações futuras, alterando suas características biológicas.¹⁰ Siqueira et al.⁷⁵ observaram atividade larvicida completa (100% de mortalidade) do biossurfactante ramnolípido (300 mg/mL) quando testado em diversas concentrações, de 50 a 300 mg/mL, em linhagens de Aedes aegypti. Eles analisaram os efeitos do tempo até a morte e das concentrações subletais na sobrevivência larval e na atividade de natação. Além disso, observaram uma diminuição na velocidade de natação após 24 a 48 horas de exposição a concentrações subletais do biossurfactante (por exemplo, 50 mg/mL e 100 mg/mL). Acredita-se que venenos com potencial para efeitos subletais sejam mais eficazes em causar danos múltiplos às pragas expostas.⁷⁶
As observações histológicas dos nossos resultados indicam que os biossurfactantes produzidos por Enterobacter cloacae SJ2 alteram significativamente os tecidos das larvas de mosquito (Cx. quinquefasciatus) e cupim (O. obesus). Anomalias semelhantes foram causadas por preparações de óleo de manjericão em An. gambiae e An. arabica, conforme descrito por Ochola77. Kamaraj et al.78 também descreveram as mesmas anormalidades morfológicas em larvas de An. Stephanie expostas a nanopartículas de ouro. Vasantha-Srinivasan et al.79 também relataram que o óleo essencial de bolsa-de-pastor danificou severamente a câmara e as camadas epiteliais de Aedes albopictus. Raghavendran et al. relataram que larvas de mosquito tratadas com 500 mg/ml de extrato micelial de um fungo Penicillium local apresentaram danos histológicos severos. A taxa de mortalidade foi de 80%. Anteriormente, Abinaya et al. Larvas de quarto instar de An foram estudadas. Stephensi e Ae. aegypti encontraram numerosas alterações histológicas em Aedes aegypti tratados com exopolissacarídeos de B. licheniformis, incluindo ceco gástrico, atrofia muscular, danos e desorganização dos gânglios do cordão nervoso72. De acordo com Raghavendran et al., após o tratamento com extrato micelial de P. daleae, as células do intestino médio dos mosquitos testados (larvas de quarto instar) apresentaram inchaço do lúmen intestinal, diminuição do conteúdo intercelular e degeneração nuclear81. As mesmas alterações histológicas foram observadas em larvas de mosquito tratadas com extrato de folha de equinácea, indicando o potencial inseticida dos compostos tratados50.
O uso do software ECOSAR recebeu reconhecimento internacional82. Pesquisas atuais sugerem que a toxicidade aguda dos biossurfactantes ECOSAR para microalgas (C. vulgaris), peixes e pulgas-d'água (D. magna) se enquadra na categoria de “toxicidade” definida pelas Nações Unidas83. O modelo de ecotoxicidade ECOSAR usa SAR e QSAR para prever a toxicidade aguda e de longo prazo de substâncias e é frequentemente usado para prever a toxicidade de poluentes orgânicos82,84.
Paraformaldeído, tampão fosfato de sódio (pH 7,4) e todos os outros produtos químicos utilizados neste estudo foram adquiridos da HiMedia Laboratories, Índia.
A produção de biossurfactante foi realizada em frascos Erlenmeyer de 500 mL contendo 200 mL de meio Bushnell Haas estéril suplementado com 1% de petróleo bruto como única fonte de carbono. Uma pré-cultura de Enterobacter cloacae SJ2 (1,4 × 10⁴ UFC/mL) foi inoculada e cultivada em agitador orbital a 37 °C e 200 rpm por 7 dias. Após o período de incubação, o biossurfactante foi extraído por centrifugação do meio de cultura a 3400 × g por 20 min a 4 °C e o sobrenadante resultante foi utilizado para fins de triagem. Os procedimentos de otimização e caracterização dos biossurfactantes foram adaptados de nosso estudo anterior²⁶.
Larvas de Culex quinquefasciatus foram obtidas do Centro de Estudos Avançados em Biologia Marinha (CAS), Palanchipetai, Tamil Nadu (Índia). As larvas foram criadas em recipientes plásticos contendo água deionizada a 27 ± 2°C e fotoperíodo de 12:12 (claro:escuro). As larvas de mosquito foram alimentadas com uma solução de glicose a 10%.
Larvas de Culex quinquefasciatus foram encontradas em fossas sépticas abertas e desprotegidas. Utilize diretrizes de classificação padrão para identificar e cultivar larvas em laboratório85. Ensaios larvicidas foram realizados de acordo com as recomendações da Organização Mundial da Saúde86. Larvas de quarto instar de quinquefasciatus foram coletadas em tubos fechados em grupos de 25 ml e 50 ml com um espaço de ar de dois terços de sua capacidade. Biossurfactante (0–50 mg/ml) foi adicionado a cada tubo individualmente e armazenado a 25 °C. O tubo controle utilizou apenas água destilada (50 ml). Larvas mortas foram consideradas aquelas que não apresentaram sinais de natação durante o período de incubação (12–48 horas)87. Calcule a porcentagem de mortalidade larval utilizando a equação (1)88.
A família Odontotermitidae inclui o cupim indiano Odontotermes obesus, encontrado em troncos em decomposição no Campus Agrícola (Universidade Annamalai, Índia). Este biossurfactante (0–50 mg/ml) foi testado utilizando procedimentos normais para determinar sua toxicidade. Após secagem em fluxo laminar de ar por 30 minutos, cada tira de papel Whatman foi revestida com o biossurfactante em concentrações de 30, 40 ou 50 mg/ml. Tiras de papel pré-revestidas e não revestidas foram testadas e comparadas no centro de uma placa de Petri. Cada placa de Petri continha cerca de trinta cupins O. obesus ativos. Os cupins do grupo controle e do grupo de teste receberam papel úmido como fonte de alimento. Todas as placas foram mantidas à temperatura ambiente durante todo o período de incubação. Os cupins morreram após 12, 24, 36 e 48 horas. A Equação 1 foi então utilizada para estimar a porcentagem de mortalidade dos cupins em diferentes concentrações de biossurfactante.
As amostras foram mantidas em gelo e acondicionadas em microtubos contendo 100 ml de tampão fosfato de sódio 0,1 M (pH 7,4) e enviadas ao Laboratório Central de Patologia da Aquicultura (CAPL) do Centro Rajiv Gandhi de Aquicultura (RGCA), Laboratório de Histologia, Sirkali, Distrito de Mayiladuthurai, Tamil Nadu, Índia, para análises posteriores. As amostras foram imediatamente fixadas em paraformaldeído a 4% a 37 °C por 48 horas.
Após a fase de fixação, o material foi lavado três vezes com tampão fosfato de sódio 0,1 M (pH 7,4), desidratado gradualmente em etanol e imerso em resina LEICA por 7 dias. A substância foi então colocada em um molde de plástico preenchido com resina e agente polimerizante, e levada a uma estufa aquecida a 37 °C até a completa polimerização do bloco contendo a substância.
Após a polimerização, os blocos foram cortados utilizando um micrótomo LEICA RM2235 (Rankin Biomedical Corporation, 10399 Enterprise Dr., Davisburg, MI 48350, EUA) com uma espessura de 3 mm. As secções foram agrupadas em lâminas, com seis secções por lâmina. As lâminas foram secas à temperatura ambiente, coradas com hematoxilina durante 7 minutos e lavadas em água corrente durante 4 minutos. Adicionalmente, aplicou-se solução de eosina na pele durante 5 minutos e enxaguou-se em água corrente durante 5 minutos.
A toxicidade aguda foi prevista utilizando organismos aquáticos de diferentes níveis tropicais: CL50 de 96 horas para peixes, CL50 de 48 horas para Daphnia magna e CE50 de 96 horas para algas verdes. A toxicidade dos biossurfactantes ramnolípidos para peixes e algas verdes foi avaliada utilizando o software ECOSAR versão 2.2 para Windows, desenvolvido pela Agência de Proteção Ambiental dos EUA (EPA). (Disponível online em https://www.epa.gov/tsca-screening-tools/ecological-struct-activity-relationships-ecosar-predictive-model).
Todos os testes de atividade larvicida e anti-cupim foram realizados em triplicata. A regressão não linear (logaritmo das variáveis ​​de resposta à dose) dos dados de mortalidade larval e de cupins foi realizada para calcular a concentração letal mediana (CL50) com intervalo de confiança de 95%, e as curvas de resposta à concentração foram geradas usando o Prism® (versão 8.0, GraphPad Software Inc., EUA) 84, 91.
O presente estudo revela o potencial dos biossurfactantes microbianos produzidos por Enterobacter cloacae SJ2 como agentes larvicidas e anti-cupins contra mosquitos, e este trabalho contribuirá para uma melhor compreensão dos mecanismos de ação larvicida e anti-cupins. Estudos histológicos de larvas tratadas com biossurfactantes mostraram danos ao trato digestivo, intestino médio, córtex cerebral e hiperplasia de células epiteliais intestinais. Resultados: A avaliação toxicológica da atividade anti-cupim e larvicida do biossurfactante ramnolípido produzido por Enterobacter cloacae SJ2 revelou que este isolado é um potencial biopesticida para o controle de doenças transmitidas por vetores, como mosquitos (Cx quinquefasciatus) e cupins (O. obesus). Há necessidade de compreender a toxicidade ambiental subjacente dos biossurfactantes e seus potenciais impactos ambientais. Este estudo fornece uma base científica para a avaliação do risco ambiental dos biossurfactantes.